若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则pcr反应变为双重pcr，双重pcr反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为---。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内标，但仍然只是一种半定量的方法。
pcr仪的分类：
按扩增目的和检测标准来分，pcr仪有普通pcr仪，pcr仪报价，梯度pcr仪，原位pcr，pcr仪，实时荧光定量pcr仪等几类。
其中，普通pcr仪一次pcr扩增只能运行一个特定退火温度；梯度pcr仪可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)，单次扩增效率更高；原位pcr能够保持细胞或组织的完整性，使pcr反应体系渗透到组织和细胞中，小型pcr仪，更有利于探讨靶dna与细胞之间的关系；实时荧光定量pcr仪是在普通pcr仪设计基础上增加荧光信号采集系统和计算机分析处理系统，形成了具有荧光定量功能的pcr仪器。您在选择pcr仪时，根据自己的检测需求、采购预算等因素选择合适的种类即可。
实时荧光定量pcr仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件，构成pcr-dna/rna实时荧光定量检测系统。样品到达域值水平所经历的循环数称为ct值（---点的循环数）。域值应设定在使指数期的扩增效率为，这样可以获得准确，可重复性的数据。如果同时扩增的还有标有相应浓度的标准品，线性回归分析将产生一条标准曲线，可以用来计算未知样品的浓度。
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