在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时,为了---实验结果的性和准确性都要在实验中使用rox(一种荧光染料)或的reference dye,这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。这样以来,真正能检测多重pcr荧光信号的有效通道只有4个,而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。有的荧光定量pcr的检测通道是只为自已厂家的的荧光染料或试剂开放的,有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。在购买前确认荧光定量pcr仪器的有效检测通道尤为重要,不能单单只听宣传。
taqman荧光探针:pcr扩增时在加入一对引物的同时加入一个特---的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;pcr扩增时,pcr检测仪,taq酶的5-3外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条dna链,就有一个荧光分子形成,荧光定量pcr仪价格,实现了荧光信号的累积与pcr产物形成完全同步。而新型taqman-mgb探针使该技术既可进行基因定量分析,小型pcr仪,又可分析基因突变(snp),pcr仪,有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。
所谓real-time q-pcr技术,是指在pcr反应体系中加入荧光基因,利用荧光信号累积实时监测整个pcr进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在 real-time 技术的发展过程中,两个重要的发现起着关键的作用:(1)在90年代早期,taqdna多聚酶的5′---外切酶活性的发现,它能降解特---荧光记探针,因此使得间接的检测pcr产物成为可能。(2)此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过程。这两个发现的结合以及相应的仪器和试剂的商品化发展导致real-time q-pcr方法在研究工作中的运用。
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